పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్ ఎలక్ట్రోఫోరేసిస్ కోసం జాగ్రత్తలు

· పాలియాక్రిలమైడ్జెల్ అక్రిలామైడ్ మోనోమర్, పాలిమరైజేషన్ ప్రారంభ పదార్థం, ఉత్ప్రేరకం మరియు ఉప్పు మరియు బఫర్ మిశ్రమాన్ని కలిపి హక్కు ద్వారా ఉండాలి.

· అక్రిలామైడ్మరియు BIS (N, N '- మిథిలీన్ డబుల్ అక్రిలామైడ్) అనేది జెల్ మ్యాట్రిక్స్ యొక్క మోనోమర్ రూపం.

· అమ్మోనియం పెర్సల్ఫేట్ అంటుకునే పాలిమరైజేషన్ ప్రక్రియను ప్రారంభిస్తుంది. జిగురును తయారు చేయడానికి నీటిలో తయారుచేసిన 10% అమ్మోనియం పెర్సల్ఫేట్ ద్రావణం అవసరం. చాలా సమాచారం క్రియాశీల ఉపయోగం యొక్క అవసరాన్ని సూచిస్తుంది. అయితే, 10% ద్రావణాన్ని 4℃ వద్ద అనేక వారాల పాటు గణనీయమైన కార్యాచరణ నష్టం లేకుండా ఉంచవచ్చు. 10 ml వరకు తయారు చేసి, జిగురు సమీకరించడంలో విఫలమైనప్పుడు విస్మరించండి.

చిట్కా: శాతంఅక్రిలామైడ్సీక్వెన్సింగ్‌లో జిగురు మరియు ప్రోటీన్ జిగురు ఒకేలా ఉండవు. ముందుగా తయారుచేసిన అక్రిలామైడ్: BIS ద్రావణాన్ని ఉపయోగిస్తుంటే, సరైన బాటిల్‌ను పొందాలని నిర్ధారించుకోండి.

· TEMED (N, N, N ', N '- టెట్రామీథైల్ ఎథిలెనెడియమైన్) అనేది ఒక ఉత్ప్రేరకం, ఇది గోధుమ రంగు సీసాలో రిఫ్రిజిరేటర్‌లో ఉంచబడుతుంది. జిగురు పోయడానికి ముందు జోడించండి.

· ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్‌లో పాలియాక్రిలమైడ్ ఎలక్ట్రోఫోరేసిస్ ఉపయోగించిన గాజును ప్రతిసారీ ముందు మరియు తరువాత కడగాలి. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ తర్వాత, వేడి సబ్బు నీటిలో మృదువైన బ్రష్ మరియు గుడ్డతో కడిగి, స్వేదనజలంతో శుభ్రం చేసి, ఆరబెట్టండి.

· తేమ మరియు ధూళి హాలో పాలిమర్‌తో కారణమవుతాయి. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్‌కు ముందు, గాజు ప్లేట్‌ను గ్లాస్ క్లీనర్‌తో శుభ్రం చేసి, మృదువైన బ్రష్‌తో తుడవండి. డిస్టిల్డ్ వాటర్‌తో కడిగి, పేపర్ వైప్‌తో పూర్తిగా ఆరబెట్టండి. కాగితంతో తుడిచే ముందు 70% ఇథనాల్‌తో కడగడం వల్ల శుభ్రపరచడం మరియు ఎండబెట్టడం వేగవంతం అవుతుంది. వరుసగా అక్రిలామైడ్ నమూనాలను జోడించండి: BIS, నీరు, బఫర్ ద్రావణం, అమ్మోనియం పెర్సల్ఫేట్, TEMED. బాగా కదిలించి వెంటనే పోయాలి.

పాలిమరైజేషన్‌కు ముందు పాలియాక్రిలమైడ్‌ను డీగ్యాస్ చేయవలసిన అవసరం లేదు. (ఆక్సిజన్ పాలిమరైజేషన్‌ను నిరోధిస్తుంది కాబట్టి బుడగలను తొలగించడానికి యాక్రిలమైడ్‌ను వాక్యూమ్‌లో ఉంచేవారు.)

క్షితిజ సమాంతర గ్లూ పాయింట్ నమూనా చిట్కాలు.

· దిగువ పెట్టెలో నల్లటి కాగితం ముక్కను ఉంచండి, మరింత స్పష్టంగా చూడటానికి కొంత నమూనా రంధ్రం చేయడానికి నల్లని నేపథ్యంలో ఉంచండి.
· గ్లూ ట్యాంక్ నిండిన బఫర్, కొల్లాయిడ్ పైన.
· అంచున లైటు ఉంటే, లైట్లు ఆన్ చేయండి, కాంతి కొల్లాయిడ్ లాగా ప్రకాశించేలా చేయండి. నమూనాను పైపెట్‌లోకి గీయండి.
· ఆటోమేటిక్ పైపెటింగ్ పరికరాన్ని ఉపయోగించడం.
· 10-200 mu లో 1 ద్రవ కదిలే బిందువును నమూనాలోని చాలా పాయింట్లలో ఉపయోగించవచ్చు. చాలా చిన్న నమూనా రంధ్రాలకు (10μ1 కంటే తక్కువ), గ్లూను క్రమం చేయడానికి ఉపయోగించే పొడవైన పైపెట్ హెడ్ మరింత సౌకర్యవంతంగా ఉంటుంది.

· నమూనాలో ముంచి పైపెట్ వేయడం, నెమ్మదిగా కదిలే ద్రవాన్ని పీల్చడం. నమూనా గ్లిజరిన్‌తో జిగటగా కనిపించవచ్చు మరియు వేగంగా పంపింగ్ చేయడం వల్ల పైపెట్ హెడ్‌లోకి గాలి బుడగలు లాగవచ్చు.

· పైపెటింగ్ హెడ్‌ను పీల్చిన తర్వాత నమూనాలు, ఫ్లూయిడ్ హెడ్‌ను పైపు అంచున లేదా తుడిచే కాగితం అంచున సున్నితంగా కదిలిస్తాయి, చుక్కల వెలుపల ద్రవ హెడ్‌ను పీల్చుకుంటాయి. నమూనాను పీల్చకుండా జాగ్రత్త వహించండి.

నమూనాను నమూనా రంధ్రంలో ఉంచండి

· కొంచెం ఒత్తిడిని ఉంచడానికి పైపెట్టింగ్ పరికరం, నమూనాలను ఓవర్‌ఫ్లో లిక్విడ్ హెడ్‌ను కొద్దిగా కదిలించేలా చేయండి.
· బఫర్‌లోకి చొప్పించబడిన పైపెట్టింగ్ హెడ్, స్పాట్ హోల్స్ కంటే కొంచెం ఎత్తులో, సానుకూల ఒత్తిడిని నిర్వహిస్తుంది. పైపెట్ యొక్క కొనను ఒక చిన్న రంధ్రంలోకి చొప్పించవచ్చు.
· నమూనాలను నెమ్మదిగా మరియు స్థిరంగా బయటకు తీయండి. పైపెట్ కొనను పాయింట్ నమూనా రంధ్రం పైన ఉంచుతారు, మరియు నమూనా రంధ్రంలోకి మునిగిపోతుంది. లోపలికి నెట్టడానికి బదులుగా నమూనా రంధ్రం నింపడానికి నమూనా మునిగిపోనివ్వండి.
· ద్రవ తలతో నమూనా యొక్క చివరి చుక్క ఒకసారి, ద్రవం రెండవ పాదం వైపు కదులుతుంది, నెమ్మదిగా ద్రవ కదలికను పెంచుతుంది, బఫర్ నుండి బయటకు కదులుతుంది.

నిలువు జిగురు నమూనాను ఎలా చేయాలి?

· నిలువు గ్లూ పాయింట్ నమూనా రంధ్రాలు రెండు గాజు ముక్కల మధ్య ఏర్పడతాయి. చాలా సన్నని జిగురులో, పైపెట్ హెడ్‌ను రెండు గాజు ప్లేట్ల మధ్య కూడా చొప్పించలేరు. గ్లిజరిన్‌ను చూడండి! పైపెట్ హెడ్‌ను నమూనా రంధ్రం మీద ఉంచండి, అప్పుడు నమూనా రంధ్రంలోకి మునిగిపోతుంది.
· నమూనాను తీసుకునే ముందు, పాలీప్రొఫైలిన్ అసిల్ జెల్ యొక్క నిలువు బిందువుతో నమూనా రంధ్రం శుభ్రంగా కడిగివేయండి. పాలిమరైజ్ చేయని అక్రిలామైడ్ మరియు నమూనా రంధ్రం దిగువన కనిపించే నీటిని కడిగివేయండి. నీరు నమూనా రంధ్రం గణనీయంగా చిన్నదిగా చేస్తుంది. 25ml లేదా 50ml సిరంజి మరియు 18-గేజ్ సూదిని ఉపయోగించండి. ఎలక్ట్రోఫోరేసిస్ బఫర్‌లో పోసి నమూనా రంధ్రం జాగ్రత్తగా ఫ్లష్ చేయండి.
· నమూనా రంధ్రాన్ని చూడటం కష్టంగా ఉండవచ్చు, కానీ అదే సమయంలో, మిగిలినది సులభం. అదనపు రంధ్రాలు ఉంటే, నమూనా బఫర్‌ను బ్రోమోఫెనాల్ బ్లూతో పరీక్షించవచ్చు.