పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ కోసం జాగ్రత్తలు

· పాలీయాక్రిలమైడ్జెల్ తప్పనిసరిగా యాక్రిలామైడ్ మోనోమర్, పాలిమరైజేషన్ ప్రారంభ పదార్థం, ఉత్ప్రేరకం మరియు ఉప్పు మరియు బఫర్ మిశ్రమం యొక్క కుడివైపున కలిసి ఉండాలి.

· యాక్రిలామైడ్మరియు BIS (N, N '- మిథిలిన్ డబుల్ అక్రిలమైడ్) అనేది మోనోమర్ రూపం జెల్ మాతృక.

· అమ్మోనియం పెర్సల్ఫేట్ అంటుకునే పాలిమరైజేషన్ ప్రక్రియను ప్రారంభిస్తుంది. గ్లూ యొక్క సూత్రీకరణకు నీటిలో తయారుచేసిన 10% అమ్మోనియం పెర్సల్ఫేట్ ద్రావణం అవసరం. చాలా సమాచారం సక్రియంగా ఉపయోగించాల్సిన అవసరాన్ని సూచించింది. అయినప్పటికీ, 10% ద్రావణాన్ని 4℃ వద్ద అనేక వారాల పాటు గణనీయమైన కార్యాచరణ నష్టం లేకుండా ఉంచవచ్చు. 10 ml వరకు తయారు చేయండి మరియు జిగురు సమగ్రంగా విఫలమైనప్పుడు విస్మరించండి.

చిట్కా: శాతంయాక్రిలామైడ్సీక్వెన్సింగ్ గ్లూ మరియు ప్రోటీన్ జిగురు ఒకేలా ఉండదు. ముందుగా తయారుచేసిన యాక్రిలామైడ్: BIS ద్రావణాన్ని ఉపయోగిస్తుంటే, సరైన బాటిల్‌ను పొందేలా చూసుకోండి.

· TEMED (N, N, N ', N '- టెట్రామిథైల్ ఇథిలెన్డియమైన్) అనేది బ్రౌన్ బాటిల్‌లో, రిఫ్రిజిరేటర్‌లో ఉంచబడిన ఉత్ప్రేరకం. జిగురు పోయడానికి ముందు జోడించండి.

· ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్‌లో పాలీయాక్రిలమైడ్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ఉపయోగించిన గాజును ప్రతిసారీ ముందు మరియు తర్వాత కడగాలి. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ తర్వాత, వేడి సబ్బు నీటిలో మృదువైన బ్రష్ మరియు గుడ్డతో కడగాలి, స్వేదనజలంతో కడిగి ఆరబెట్టండి.

· తేమ మరియు దుమ్ము బోలు పాలిమర్‌తో కారణమవుతాయి. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ముందు, గ్లాస్ క్లీనర్‌తో గ్లాస్ ప్లేట్‌ను శుభ్రం చేసి, మృదువైన బ్రష్‌తో తుడవండి. స్వేదనజలంతో కడగాలి మరియు కాగితం తుడవడంతో పూర్తిగా ఆరబెట్టండి. కాగితంతో తుడిచే ముందు 70% ఇథనాల్‌తో కడిగి శుభ్రం చేయడం మరియు ఎండబెట్టడం వేగవంతం చేయడంలో సహాయపడుతుంది. అక్రిలామైడ్ యొక్క నమూనాలను వరుసగా జోడించండి: BIS, నీరు, బఫర్ ద్రావణం, అమ్మోనియం పెర్సల్ఫేట్, TEMED. బాగా షేక్ మరియు వెంటనే పోయాలి.

పాలిమరైజేషన్‌కు ముందు పాలీయాక్రిలమైడ్‌ను డీగ్యాస్ చేయడం అవసరం లేదు. (ఆక్సిలమైడ్‌ను బుడగలు తొలగించడానికి వాక్యూమ్‌లో ఉంచుతారు, ఎందుకంటే ఆక్సిజన్ పాలిమరైజేషన్‌ను నిరోధిస్తుంది.)

క్షితిజసమాంతర గ్లూ పాయింట్ నమూనా చిట్కాలు.

దిగువ పెట్టెలో నలుపు కాగితం ముక్కను ఉంచండి, మరింత స్పష్టంగా చూడటానికి కొంత నమూనా రంధ్రం చేయడానికి నలుపు నేపథ్యం.
· జిగురు ట్యాంక్ నిండిన బఫర్, కొల్లాయిడ్ మీదుగా.
· అంచులో లైట్ ఉంటే, లైట్లను ఆన్ చేయండి, కాంతిని కొల్లాయిడ్ ప్రకాశింపజేయండి. పైపెట్‌లోకి నమూనాను గీయండి.
· ఆటోమేటిక్ పైప్టింగ్ పరికరాన్ని ఉపయోగించడం.
· 10-200 mu 1 లిక్విడ్ మూవింగ్ పాయింట్‌ని నమూనాలోని చాలా పాయింట్‌లలో ఉపయోగించవచ్చు. చాలా చిన్న నమూనా రంధ్రాల కోసం (10μ1 కంటే తక్కువ), గ్లూ సీక్వెన్సింగ్ కోసం ఉపయోగించే పొడవైన పైపెట్ తల మరింత సౌకర్యవంతంగా ఉంటుంది.

· పైప్టింగ్ కేవలం నమూనాలో మునిగి, నెమ్మదిగా కదిలే ద్రవాన్ని పీల్చడం. నమూనా గ్లిజరిన్‌తో జిగటగా కనిపించవచ్చు మరియు వేగంగా పంపింగ్ చేయడం వల్ల పైపెట్ హెడ్‌లోకి గాలి బుడగలు వస్తాయి.

· పైపెటింగ్ హెడ్‌ని పీల్చిన తర్వాత నమూనాలు, చుక్కల వెలుపల ద్రవ తలను పీల్చడం లేదా తుడవడం కాగితం అంచుపై ద్రవం తలని సున్నితంగా కదిలిస్తాయి. నమూనాను పీల్చుకోకుండా జాగ్రత్త వహించండి.

నమూనా రంధ్రంలో నమూనా ఉంచండి

· కొద్దిగా ఒత్తిడి ఉంచడానికి పైప్టింగ్ పరికరం, నమూనాలను కొద్దిగా ఓవర్ఫ్లో ద్రవ తల తరలించడానికి.
· బఫర్‌లోకి చొప్పించిన పైప్టింగ్ హెడ్, స్పాట్ హోల్స్ కంటే కొంచెం ఎత్తులో, సానుకూల ఒత్తిడిని నిర్వహిస్తుంది. పైపెట్ యొక్క కొనను చిన్న రంధ్రంలోకి చొప్పించవచ్చు.
· నెమ్మదిగా మరియు స్థిరంగా నమూనాలు బయటకు. పైపెట్ చిట్కా పాయింట్ నమూనా రంధ్రం పైన ఉంచబడుతుంది మరియు నమూనా రంధ్రంలోకి మునిగిపోతుంది. లోపలికి నెట్టడానికి బదులుగా నమూనా రంధ్రం పూరించడానికి నమూనా మునిగిపోనివ్వండి.
లిక్విడ్ హెడ్‌తో నమూనా యొక్క చివరి డ్రాప్ ఒకసారి, ద్రవం రెండవ పాదానికి కదులుతుంది, నెమ్మదిగా ద్రవ కదలికను పెంచుతుంది, బఫర్ నుండి బయటకు వెళ్లండి

నిలువు జిగురు నమూనా ఎలా చేయాలి?

· రెండు గాజు ముక్కల మధ్య ఏర్పడిన నిలువు గ్లూ పాయింట్ నమూనా రంధ్రాలు. చాలా సన్నని జిగురులో, పైపెట్ తల రెండు గాజు పలకల మధ్య కూడా చొప్పించబడదు. గ్లిజరిన్ చూడండి! నమూనా రంధ్రంపై పైపెట్ తల ఉంచండి మరియు నమూనా రంధ్రంలోకి మునిగిపోతుంది.
· పాయింట్ నమూనా ముందు, పాలీప్రొఫైలిన్ ఎసిల్ జెల్ యొక్క నిలువు బిందువును ఉంచాలని నిర్ధారించుకోండి నమూనా రంధ్రం శుభ్రంగా కడిగివేయబడుతుంది. అన్‌పాలిమరైజ్డ్ అక్రిలమైడ్ మరియు నమూనా రంధ్రం దిగువన కనిపించే నీటిని కడగండి. నీరు నమూనా రంధ్రం గణనీయంగా చిన్నదిగా చేయవచ్చు. 25ml లేదా 50ml సిరంజి మరియు 18-గేజ్ సూదిని ఉపయోగించండి. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ బఫర్‌లో పోయాలి మరియు నమూనా రంధ్రం జాగ్రత్తగా ఫ్లష్ చేయండి.
· నమూనా రంధ్రం చూడటం కష్టంగా ఉంటుంది, కానీ అదే సమయంలో, మిగిలినది సులభం. అదనపు రంధ్రాలు ఉన్నట్లయితే, నమూనా బఫర్‌ను బ్రోమోఫెనాల్ బ్లూతో పరీక్షించవచ్చు.